Der Anime Night Walker handelt von dem Vampir Tatsuhiko Shido. Er ist schon sehr alt und kann sich nicht mehr an die Zeit erinnern, in der er ein Mensch gewesen ist. Damals wurde er gegen seinen Willen von dem Vampir Cain verwandelt. Er konnte sich mit der dunklen Seite des Vampirismus nicht abfinden und hat sich deshalb entschlossen Menschen zu schützen und gegen die Wesen der Dunkelheit, die so genannten „Night breed“ zu kämpfen. Er lebt nun in der modernen Zeit in der Präfektur Kanagawa und arbeitet als Privatdetektiv. Bei seinen Fällen wird er von Yayoi Matsunaga unterstütz, einer Agentin des N.O.S., einer Organisation, die sich auf die Bekämpfung der Night breed spezialisiert hat. Shido hat Yayoi in der Vergangenheit einen großen Gefallen getan und sie verbindet ein tiefes Band der Freundschaft, deshalb lässt sie ihn auch ihr Blut trinken, so dass er keine Jagt auf Menschen machen muss. Außerdem ist da noch die Fee Guni, die aussieht wie ein kleiner grüner Dämon und Riho Yamazaki, eine Schülerin, die ihre Eltern durch die Night breeds verloren hat. Riho hat keine Verwandte und hilft Shido indem sie im Büro für Ordnung sorgt. Immer wenn die Polizei nicht mehr weiter weiß, wir Shido zu Unterstützung gerufen, denn überall tauchen die Night breeds auf. Sie sind Dämonen, die menschliche Körper übernehmen und sich nur mit Menschenfleisch ernähren können. Shido hilft den Menschen und tötet die Dämonen, trotzdem kann auch er nicht leugnen, dass er eine dunkle Seite hat. In der Vergangenheit mit Cain hat auch er Menschen für Blut getötet und er weiß, dass er mit diese Schuld für die Ewigkeit tragen muss. Kann es ihm gelingen seine Menschlichkeit zu erhalten und kann er die Verantwortung tragen, wenn er selbst einen Menschen in einen Vampir verwandelt hat?